Расход м 150 на стяжку


Расход песчано-цементной смеси М 150 для стяжки — приготовление смеси

В строительной сфере считаются востребованными сухие смеси на всех технологических этапах. Они довольно часто применяются в процессах, связанных с ремонтом (реставрацией). Основным компонентом вяжущего средства является цементно-песчаная смесь. Общие технические условия на ПЦС М 150 расход для стяжки детально описаны в ГОСТ.

Универсальная ЦПС М 150

Особенности смесей, характеристики, рекомендации выбора

Главными компонентами являются песок и цемент. Число, которое стоит после буквы «М», обозначает нагрузку (килограмм на кв. см), которую выдерживает отвердевший раствор. Учитывают, что показатель приблизительный, так как большинство зависит от разных факторов: правильности приготовления из универсального раствора, соблюдения технологий проведения работ, прочие. Например, нагрузка для марки М150 ориентировочно равна 150 килограмм на 1 см 2.

ЦПС имеют следующие характеристики:

  1. Время схватывания.
  2. Состав, пропорции. К примеру, в М150, 100 не бывает в составе органических примесей.
  3. Возможность удерживать воду (по ГОСТу этот показатель составляет 90%).
  4. Морозостойкость, которая определяется циклами.
  5. Коэффициент расслаиваимости.
  6. Расход песчано-цементного раствора на 1 м2.
  7. Толщина.

Если реализуются смеси с похожими характеристиками, то сначала следует проанализировать соотношение высоты, расхода (кг/м2). Практика показывает: покупка ЦПС по низкой стоимости в итоге окажется дороже состава с высокой ценой.

При покупке следует учитывать, что указанная производителем норма потребления на кв. метр ориентирована на специалистов высокого класса. Это момент стоит учитывать ещё при покупке раствора. Фактический расход будет выше на 12%.

Разновидности смесей

М200, 100, 300

М100

ПЦС М100 – используют для изготовления песчано-цементных растворов. Помимо главных составляющих в состав включают известь. Их стоимость за счёт этого снижается. Состав используется для штукатурки, равнения основы, устранения небольших дефектов.

М200

Состав называют монтажным кладочным. Его выпускают несколькими модификациями, которые ориентируются на приготовление штукатурок, для стяжки, состава высокой прочности для кладки. При толщине 0,5 см примерный расход составляет 8,5 кг на м 2.

М300

ЦПС М300 называют фундаментной. Они имеют высокую стоимость в сравнении с остальными видами. Используют для растворов при укладке блочных конструкций, для обустройства стяжек. Расход на квадратный метр составляет 19,5 кг.

Внимание! Для штукатурки цементно-песчаная смесь М300 не подходит.

М150

Раствор М150 – универсальный, который используется для проведения практически всех операций. Подходит для кладочного, штукатурного растворов. Её используют для устройства стяжек, при проведении разных ремонтных работ. М150 заменяет любую другую смесь.

Когда правильно определяются с требуемыми показателями раствора, тогда изменением пропорций компонентов добиваются улучшения конкретных качеств. Они имеют приемлемую стоимость.

К характеристикам состава М150 относят:

  • толщина слоя – 0,5-5 см;
  • расход смеси на 1 м2 – 16500 г на 1 см;
  • время схватывания  составляет 2 часа, а отвердения 24 часа.

Приобретая состав марки М150, узнают о добавках в нём. Например, соответствует ли смесь по показателям морозостойкости. Состав имеет массу областей использования:

  • фасад сооружения;
  • цоколь;
  • работы внутри здания;
  • фасадные работы;
  • помещения с повышенной влажностью.

Эта смесь соответствует требованиям потребителя по цене, расходу, качеству.

Оптимальный расход М150

Пропорции ингредиентов раствора

При выборе для работы ПЦС М150 её расход для стяжки составляет 22 г на 1 м2 такой расход материала будет оптимальным для стяжки толщиной 1 см. Вяжущим материалом является цемент, который придаёт ей разные характеристики.

Толщина слоя варьируется 5-50 мм и зависит от проводимых работ. Наносится такая смесь вручную. Жизнеспособность состава составляет 120 минут, поэтому большие объёмы не замешивают. Полную прочность смесь набирает через 28 суток.

Прочность на изгиб имеет 2 МПа, а прочность адгезии (процесс сцепления 2 разных поверхностей) 0,5 МПа. Чтобы повысить адгезию имеет значение правильность подготовки поверхности.

Самостоятельное приготовление раствора

Приготовление ЦПС

На пропорции оказывают влияние несколько показателей:

  • назначение раствора;
  • марка цемента;
  • его производство.

Учитывают, что при складировании цемент утрачивает свойства, даже при правильном хранении. Поэтому долю в составе увеличивают с учётом срока складирования:

Для стяжек берут цемент 500, 400 в пропорциях часть цемента 2 песка, часть вяжущего материала 3 части песка (для марки 500). Чтобы уменьшить вероятность образования трещин добавляют для стяжки пола фиброволокно в расчёте 0,9 кг на куб. метр.

Для кладки используют состав в пропорциях часть цемента и 5 частей песка – зависит от состояния песка (как просушен, просеян). Раствор делают в малом объёме, определяя опытным путём требуемую пропорцию смеси, расход раствора, что оптимизирует расход материала. Для штукатурки берут вяжущие марки 200, 300 в пропорции 1/3.

Внимание! Перемешивать раствор следует тщательно, а для этого подходит насадка к электродрели, снижение расхода цемента, повышение количества песка приведёт к образованию трещин, сколов, лишняя вода приводит к уменьшению прочности и увеличению сроков отвердения.

Если цементно-песчаная смесь М150 приготовлена по правилам, то после застывания стяжка будет прочной, качественной и прослужит долго. Обязательно учитывают пропорции и сроки хранения цемента.

Заливка стяжки смесью М150:

Вконтакте

Facebook

Twitter

Google+

Средняя оценка оценок более 0 Поделиться ссылкой

Дорожно-строительная техника Вибробетонная стяжка

900 долларов.00–1900,00 / Задавать | 1 компл. / Компл. (Мин. Заказ)

.

Измерение скорости потребления кислорода (OCR) и ...

Аннотация

Клетки млекопитающих генерируют АТФ в результате митохондриального (окислительное фосфорилирование) и немитохондриального (гликолиз) метаболизма. Известно, что раковые клетки перепрограммируют свой метаболизм, используя различные стратегии для удовлетворения энергетических и анаболических потребностей (Koppenol et al. , 2011; Zheng, 2012). Кроме того, каждая раковая ткань имеет свои индивидуальные особенности обмена веществ.Митохондрии не только играют ключевую роль в энергетическом обмене, но и в регуляции клеточного цикла клеток. Следовательно, митохондрии стали потенциальной мишенью для противоопухолевой терапии, так как они структурно и функционально отличаются от своих незлокачественных аналогов (D'Souza et al. , 2011). Мы подробно описываем протокол измерения скорости потребления кислорода (OCR) и скорости внеклеточного закисления (ECAR) в живых клетках с использованием анализатора внеклеточного потока Seahorse XF24 (рис. 1).Анализатор внеклеточного потока Seahorse XF24 непрерывно измеряет концентрацию кислорода и поток протонов в супернатанте клетки с течением времени (Wu et al. , 2007). Эти измерения преобразуются в значения OCR и ECAR и позволяют проводить прямую количественную оценку митохондриального дыхания и гликолиза. С помощью этого протокола мы стремились оценить базальную митохондриальную функцию и митохондриальный стресс трех различных линий раковых клеток в ответ на цитотоксическое соединение тест-свинца менсакарцин, чтобы исследовать механизм его действия.Клетки помещали в планшеты для культивирования клеток XF24 и выдерживали в течение 24 часов. Перед анализом культуральную среду заменили небуферизованной средой DMEM pH 7,4, а затем клеткам дали уравновеситься в инкубаторе без CO 2 непосредственно перед анализом метаболического потока с помощью Seahorse XF, чтобы обеспечить точные измерения изменений единиц милли-pH. . OCR и ECAR измеряли в базовых условиях и после инъекции соединений через порты для инъекций лекарств. С помощью описанного протокола мы оцениваем основные профили энергетического метаболизма трех клеточных линий, а также ключевые параметры функции митохондрий в ответ на наше тестируемое соединение и путем последовательного добавления агентов, нарушающих митохондрии, олигомицина, FCCP и ротенона / антимицина A.


Рис. 1. Обзор эксперимента с морским коньком

Ключевые слова: биоэнергетика, Seahorse XF, митохондриальный метаболизм, гликолиз, митохондриальное дыхание

Общие сведения

Натуральные продукты - это небольшие молекулы, которые изолированы от природных источников. За последнее столетие эти молекулы сыграли важную роль в лечении болезней человека, особенно в химиотерапевтических препаратах. Метаболиты, такие как таксол, винкристин и доксорубицин, произвели революцию в том, как мы лечим злокачественные опухоли, и другие природные продукты, например рапамицин, олигомицин и бафиломицин, используются в качестве молекулярных зондов и позволяют проводить молекулярные исследования биохимических и клеточных процессов в лаборатории.Изучая механизм действия цитотоксического природного продукта менсакарцина, мы обнаружили, что флуоресцентно меченый зонд менсакарцина в значительной степени локализуется в митохондриях (Plitzko et al. , 2017). Чтобы выяснить, могут ли цитотоксические свойства менсакарцина быть следствием нарушения функции митохондрий, мы попытались изучить влияние менсакарцина на биоэнергетику клеток. Используя анализатор внеклеточного потока Seahorse, мы отслеживали уровни потребления кислорода клетками (OCR) и скорость внеклеточного закисления (ECAR) в режиме реального времени в качестве показателей митохондриального дыхания и гликолиза, соответственно (Wu et al., 2007; Serill et al. , 2015). Анализатор внеклеточного потока Seahorse XF24 позволяет непрерывно проводить прямую количественную оценку митохондриального дыхания и гликолиза живых клеток. В приборе используется картридж сенсора в формате 24-луночного планшета, каждый сенсор снабжен двумя встроенными флуорофорами: один гасится кислородом (O 2 ), а другой чувствителен к изменению pH. Во время измерений картридж датчика опускается на 200 мкм над монослоем клеток, образуя микрокамеру объемом около 2 мкл.Прибор «Морской конек» содержит пучки волоконно-оптических кабелей, которые излучают свет, возбуждают флуорофоры и затем измеряют изменение излучения флуорофора. Очень маленький испытательный объем, образованный переходной микрокамерой, позволяет проводить чувствительные, точные и неразрушающие измерения параметров в реальном времени. Изменения концентрации кислорода и pH автоматически рассчитываются и сообщаются как скорость потребления кислорода (OCR) и скорость дополнительного подкисления клеток (ECAR). После завершения измерения датчики поднимаются, что позволяет большему объему среды, расположенному выше, смешиваться со средой в переходной микрокамере, восстанавливая значения до базового уровня.Картридж сенсора содержит порты, которые позволяют последовательно добавлять до четырех соединений на лунку во время аналитических измерений.

С помощью описанного протокола мы оценили энергетический метаболизм трех клеточных линий (HCT-116, SK-Mel-28 и SK-Mel-5) (рис. 6). Было обнаружено, что добавление менсакарцина оказывает выраженное влияние на базальную OCR клеток меланомы и не влияет на усиление ECAR. Повышение гликолиза часто наблюдается как компенсаторная реакция. Митохондрии необходимы для энергетического метаболизма клеток и играют ключевую роль в апоптотической гибели клеток.Нарушение митохондриального дыхания или равновесия между проапоптотическими и антиапоптотическими белками может вызвать митохондриальную недостаточность. Чтобы получить представление об индуцированном митохондриальном нарушении в клетках меланомы, мы оценили ключевые параметры митохондриального дыхания, последовательно подвергая клетки воздействию хорошо описанных реагентов, нарушающих митохондрии. После добавления нашего тестируемого соединения менсакарцина мы последовательно добавляли олигомицин, FCCP и, наконец, ротенон и антимицин A (рис. 5).Олигомицин ингибирует АТФ-синтазу и снижает OCR, FCCP отделяет потребление кислорода от производства ATP и увеличивает OCR до максимального значения, а антимицин A и ротенон нацелены на цепь переноса электронов и снижают OCR до минимального значения. Протокол стресс-теста митохондрий предоставляет информацию о базальном дыхании, АТФ-связанном дыхании, утечке протонов, максимальной дыхательной способности и немитохондриальном дыхании клеток. Следовательно, этот анализ может быть использован для понимания механизма действия соединений, которые непосредственно воздействуют на митохондриальное дыхание.

Традиционные измерения митохондриальной функции или гликолиза требуют кислородного электрода или наборов и красителей, которые используют колориметрическое или флуориметрическое определение (Li and Graham, 2012; TeSlaa and Teitell, 2014). Большинство из этих методов являются инвазивными и громоздкими, которые допускают только небольшую пропускную способность. Напротив, анализатор Seahorse с его системой картриджей сенсоров позволяет измерять митохондриальное дыхание и гликолиз в реальном времени и неинвазивным способом, который не требует каких-либо красителей или этикеток.Исследования клеточного энергетического метаболизма очень актуальны во всех областях клеточной биологии млекопитающих. Следующий протокол был разработан для исследователей в области биологии рака, но с подходами, которые подходят для изучения энергетического метаболизма во всех системах клеток млекопитающих.

Материалы и реагенты

  1. CELLSTAR ® Планшеты для культивирования тканей, 96-луночные (Greiner Bio One International, номер по каталогу: 655180)
  2. Стерильные наконечники для пипеток с штативом (1 мл и 200 мкл) (VWR, номера по каталогу: 613-0738; 613-0742)
  3. Стерильные бассейны (Corning, Costar ® , каталожный номер: 4870)
  4. Стерильные пробирки с реагентами (15 и 50 мл) (VWR, каталожные номера: 89039-668; 89039-662)
  5. Стерильные серологические пипетки (5, 10, 25, 50 мл) (Fisher Scientific, каталожные номера: 13-678-11, 13-678-11D, 13-678-11E, 13-678-11F)
  6. Стеклянные флаконы (500 мл) (Fisher Scientific, каталожный номер: FB8001000)
  7. Клетки HCT-116, SK-Mel-5 и SK-Mel-28 (ATCC, каталожные номера: CCL-247, HTB-70, HTB-72)
  8. Seahorse XF24 FluxPak (включая картриджи датчиков, планшеты для культур тканей, калибровочный раствор и калибровочные планшеты) (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния)
  9. Трипсин / ЭДТА (0.25% / 2,21 мМ) (Corning, каталожный номер: 25-053-Cl)
  10. 1x Ca 2+ / Mg 2+ DPBS без (Thermo Fisher Scientific, Gibco TM , каталожный номер: 141
)
  • Жидкая среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM) (Corning, номер по каталогу: 10-013)
  • Фетальная бычья сыворотка (FBS) (Atlanta Biologicals, каталожный номер: S11150)
  • Раствор пенициллина / стрептомицина 100x (Corning, номер по каталогу: 30-002-Cl)
  • Порошок модифицированной Дульбекко среды Игла (DMEM) без Na 2 HCO 3 , без HEPES (Corning, номер по каталогу: 50-013)
  • Гидроксид натрия (NaOH) (VWR, номер в каталоге: 97064-476)
  • Олигомицин (Merck, каталожный номер: 495455-10MG)
  • ДМСО (VWR, каталожный номер: BDh2115-1LP)
  • FCCP (Cayman Chemical, номер в каталоге: 15218)
  • Ротенон (Cayman Chemical, каталожный номер: 13995)
  • Антимицин A (Enzo Life Sciences, номер по каталогу: ALX-380-075-M005)
  • Питательные среды (10% (об. / Об.) FBS) (см. Рецепты)
  • Среда для анализа (см. Рецепты)
  • NaOH (1 M) (см. Рецепты)
  • Олигомицин (10 мкМ) (см. Рецепты)
  • FCCP (5 мкМ) (см. Рецепты)
  • Ротенон (5 мкМ) / антимицин A (5 мкМ) (см. Рецепты)
  • Оборудование

    1. Гемацитометр (Hausser Scientific, каталожный номер: 1490)
    2. Шкаф биологической безопасности, класс II, тип A2 (NuAire, модель: NU-425-400ES)
    3. Анализатор внеклеточного потока Seahorse XF (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния)
    4. Pipet-Lite Pipette XLS STD 20 XLS (Mettler Toledo, Rainin, модель: SL-2XLS +)
    5. Pipet-Lite Pipette XLS STD 200 (Mettler Toledo, Rainin, модель: SL-200XLS +)
    6. Pipet-Lite Pipette XLS 1000 (Mettler Toledo, Rainin, модель: SL-1000XLS +)
    7. Многоканальный дозатор Pipet-Lite XLS 8-CH 1200 (Mettler Toledo, Rainin, модель: L8-1200XLS +)
    8. Многоканальный дозатор Pipet-Lite XLS 8-CH 200 (Mettler Toledo, Rainin, модель: L8-200XLS +)
    9. Насос аспирационный
    10. Увлажненный инкубатор без CO 2 (XF Prep Station; Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния)
    11. Мелководная баня (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific TM , модель: Precision 180)
    12. Контроллер дозатора (BrandTech Scientific, модель: Accu-Jet ® Pro, номер по каталогу: 26330)
    13. Увлажненный, 37 ° C, 5% CO 2 инкубатор (Eppendorf, модель: Galaxy ® 170 R)
    14. Биомедицинская морозильная камера -20 ° C (Sanyo, модель: MDF-U731M)
    15. Автоклав (объединенные системы стерилизации, модель: SSR-3A, ADVPB)
    16. Инвертированный световой микроскоп (Nikon Instruments, модель: Eclipse TS100)
    17. pH-метр с полумикроэлектродом (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific TM , модель: Orion Star TM A211, с электродом ROSS 8103BN: (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific TM , номер по каталогу: 8103BN)

    Программного обеспечения

    1. Программное обеспечение Seahorse Bioscience XF24
    2. Excel (Microsoft)
    3. Призма GraphPad 5.0 (GraphPad Software, Inc., Ла-Хойя, Калифорния)

    Процедура

    1. Оптимизация плотности посева
      В начальном эксперименте оптимальная плотность посева требуется для каждого типа клеток. Обычно плотность клеток составляет от 10 000 до 60 000 клеток на лунку и может широко варьироваться в зависимости от клеточной линии. Первой точкой ориентации может быть номер ячейки, обеспечивающий слияние прибл. 95% в течение ночи в 96-луночном планшете для культивирования клеток, поскольку посевная поверхность сопоставима с поверхностью для культивирования морских коньков.Количество засева должно давать сплошной, здоровый и устойчивый монослой в день проведения анализа.
      1. Клетки HCT-116, SK-Mel-5 и SK-Mel-28 высевали в планшет для культивирования клеток Seahorse XF24 при различных концентрациях от 10 000 до 30 000 клеток / лунку с помощью двухэтапной техники посева, как описано ниже в Процедуре B ( Фигура 2). Рекомендуется высев клеток в трех экземплярах.


        Рис. 2. Схема планшета для оценки плотности клеток. Здесь показан пример схемы посева для линий клеток SK-Mel-5 и SK-Mel-28 (плотность посева для клеток HCT-116 оценивалась на втором планшете; не показано).

      2. Затем клетки анализировали в приборе XF24, как описано в Процедуре E (без загрузки соединений в порты), используя команды таблицы 1.

        Таблица 1. Команды протокола для оценки плотности клеток

        Как видно на рисунке 3, линейное увеличение значений OCR с увеличением плотности клеток наблюдалось во всех трех линиях клеток. Значения ECAR начинают выравниваться на уровне 20000 клеток / лунку для SK-Mel-28 и SK-Mel-5, в то время как для HCT-116 они намного ниже и постоянно увеличиваются.Таким образом, было выбрано количество посева 20000 клеток на лунку для SK-Mel-28 и SK-Mel-5 и 35000 клеток на лунку для HCT-116, чтобы гарантировать, что они находятся в пределах линейного диапазона ответа при высоких значениях считывания, чтобы наблюдать увеличение а также снижение OCR и ECAR.


        Рисунок 3. Оптимизация условий анализа: оценка OCR и ECAR в зависимости от плотности посева трех различных клеточных линий


    2. Посев клеток в планшет для культивирования тканей Seahorse XF24 (день 1)
      Примечание. Посев и выращивание клеток выполняются с использованием хорошей методики культивирования стерильных клеток. Двухэтапный метод посева используется для получения однородного ровного монослоя, который жизненно важен для получения последовательных и точных данных:
      1. Предварительно нагрейте питательную среду, раствор трипсина и DPBS до 37 ° C.
      2. Для прилипших клеток промойте клетки DPBS, добавьте трипсин и подождите, пока клетки не начнут отслаиваться. Добавьте культуральную среду с сывороткой, чтобы дезактивировать трипсин, и пипеткой вверх и вниз, чтобы создать однородную суспензию клеток. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра и ресуспендируйте клетки в среде для выращивания до желаемой конечной концентрации для посева в 100 мкл.
      3. Планшет 100 мкл клеточной суспензии в планшет для культуры ткани Seahorse XF24. Поместите только среду (без клеток) в лунки для коррекции фона (A1, B4, C3, D6).
      4. Оставьте культуральную чашку на 1 час в биоглобуке, не перемещая ее (для равномерного оседания клеток).
      5. Поместите культуральный планшет в инкубатор (37 ° C, 5% CO 2 ) на 4 часа.
      6. Осторожно добавьте 150 мкл питательной среды (конечный объем в лунке 250 мкл).Держите наконечник пипетки под углом и добавляйте в лунку, чтобы не разрушить ровный слой вновь прикрепившихся клеток.
      7. Позвольте клеткам расти в течение ночи при 37 ° C, 5% CO 2 .

    Примечание. Следующие шаги выполняются без использования стерильной техники, но необходимо соблюдать осторожность, чтобы клетки и оборудование были как можно более чистыми.
    1. Датчики гидратации (день 1)
      1. Откройте XF 24 FluxPak и извлеките картридж датчика (зеленый) и калибровочную пластину (прозрачную) (Рисунок 4).


        Рис. 4. Картридж датчика Seahorse XF 24. A. Картридж датчика находится наверху калибровочной пластины с показанными отверстиями для впрыска. B. Нижняя сторона сенсорной пластины, на которой показаны сенсоры со встроенными флуорофорами.

      2. Поместите картридж датчика (датчики вверх) рядом с калибровочной пластиной (будьте осторожны, не касайтесь датчиков).
      3. Заполните каждую лунку калибровочного планшета 1 мл калибранта Seahorse XF.
      4. Опустите картридж датчика на калибровочную пластину, погрузив датчики в калибрант (будьте осторожны, не касайтесь стенок датчиками).
      5. Поместите в инкубатор без CO 2 37 ° C на ночь. Чтобы предотвратить испарение калибранта XF, убедитесь, что инкубатор увлажнен должным образом.

    2. Стабилизация инструмента (день 1)
      1. Включите анализатор XF24, откройте программное обеспечение Seahorse Bioscience и войдите в систему.
      2. Напишите шаблон анализа. При планировании и написании протокола анализа будьте осторожны, чтобы не создать протокол, который длиннее, чем клетки могут обойтись без CO 2 в небуферизованной среде.В зависимости от типа ячейки это 2-3 часа. Если есть сомнения, анализ жизнеспособности клеток можно провести после анализа морского конька.
      3. Оставьте анализатор XF24 на ночь с запущенным программным обеспечением XF24 и войдите в систему, чтобы обеспечить уравновешивание до 37 ° C.

    3. Анализ морского конька (день 2)
      1. Проверить слияние ячеек. Необходимо равномерное расстояние между ячейками, без больших скоплений ячеек или пустых участков, так как это может снизить точность данных.
      2. Предварительно нагрейте среду для анализа до 37 ° C.
      3. Предварительно нагрейте соединения и при необходимости доведите pH до 7,4 с помощью NaOH (1 M).
      4. Выполните обмен среды в планшете для культуры ткани Seahorse XF24:
        1. Удалите 150 мкл ростовой среды с помощью многоканальной пипетки.
        2. Добавьте 1 мл среды для анализа с помощью многоканальной пипетки.
        3. Удалите 1 мл многоканальной пипеткой.
        4. Добавьте 475 мкл среды для анализа с помощью многоканальной пипетки (конечный объем 575 мкл).
        5. Поместите планшет с клетками в инкубатор без CO 2 на прибл. 60 мин.
      5. Загрузите картридж с желаемыми соединениями:
        1. Предварительно нагрейте состав до 37 ° C.
        2. Загрузите 50–100 мкл соединения в соответствующий порт картриджа (для митохондриального стресс-теста: 64 мкл в порт A, 71 мкл в порт B, 79 мкл в порт C, 88 мкл в порт D). (см. Примечание 1) Загрузите эквивалентные количества среды для анализа в эквивалентный порт для фоновых лунок (см. Примечание 2).
        3. Поместите обратно в инкубатор (без CO 2 ) на 10 мин, чтобы снова нагреться до 37 ° C. Обращайтесь осторожно, переносите только за калибровочную пластину. Двигайтесь как можно меньше.
      6. Калибровка и запуск анализа морских коньков:
        1. Загрузите шаблон анализа в программное обеспечение Seahorse XF24.
        2. Нажмите зеленую кнопку «СТАРТ».
        3. Убедитесь, что вы загрузили правильный протокол, правильный каталог для сохранения и имя для сохранения.
        4. Нажмите старт'.
        5. Загрузите картридж датчика с калибровочной пластиной в лоток для инструментов (выемка идет в переднем левом углу. Убедитесь, что пластина установлена ​​правильно и ровно между всеми 8 выступами)
        6. Следуйте инструкциям на экране, чтобы откалибровать и уравновесить датчики.
        7. После завершения этапа уравновешивания удалите калибровочный планшет и замените его планшетом для культивирования клеток.

    4. Команды протокола (митохондриальный стресс-тест, таблица 2, рисунок 5)

      Таблица 2. Протоколные команды для митохондриального стресс-теста

    5. Анализ данных

      Первоначально результаты были просмотрены с помощью программы просмотра данных seahorse XF, которая автоматически сохраняет данные в виде файла MS Excel (.xls). Графический и статистический анализ проводился с помощью GraphPad Prism. Достоверность наблюдаемых различий в базовой биоэнергетике клеточных линий оценивали с помощью непараметрического теста Краскела-Уоллиса с последующим апостериорным тестом множественного сравнения Данна.Во всех случаях значимым считалось P <0,05. Экспериментальные значения представлены как среднее ± стандартное отклонение (рис. 5) или в виде прямоугольной диаграммы (рис. 6).


      Рисунок 5. Митохондриальный стресс-тест. OCR измеряли после инъекции менсакарцина (черная стрелка) в различных концентрациях в клетки SK-Mel-28 с последующими последовательными инъекциями олигомицина (1 мкМ), FCCP (0,5 мкМ) и антимицина A (0,5 мкМ) / ротенона (0,5 мкМ). мкМ) (n = 3).


      Рисунок 6.Базальное биоэнергетическое состояние клеток SK-Mel-28, SK-Mel-5 и HCT-116. Базальный энергетический метаболизм каждой клеточной линии оценивали путем анализа соотношений OCR / ECAR. OCR и ECAR были получены по тому же протоколу, что и описанный выше, но без введения соединений. Команды протокола состояли из одного цикла с 8 измерениями. Было выполнено несколько отдельных анализов (n = 25).

      Примечания

      1. Вставьте пипетку в порты под углом, не касайтесь дна, не постукивайте, чтобы предотвратить утечку.Жидкость удерживается только капиллярными силами.
      2. В порты фоновых лунок обязательно загружать аналитическую среду, которая содержит такую ​​же концентрацию ДМСО, как и соединения, чтобы учесть любое воздействие ДМСО на клетки.
      3. После закачивания в лунки соединения разбавляют 1:10. Это даст конечную концентрацию 1 мкМ олигомицина и 0,5 мкМ FCCP, ротенона и антимицина А, соответственно, в лунке для культивирования клеток.

      Рецепты

      1. Питательные среды (10% (об. / Об.) FBS)
        Примечание. Работайте в стерильных условиях в вытяжном шкафу с ламинарным потоком.
        1. Открытая бутылка с жидкостью DMEM
        2. Вынуть 55 мл стерильной серологической пипетки и слить жидкость
        3. Добавьте 50 мл FBS стерильной серологической пипеткой
        4. Добавьте 5 мл раствора пенициллина / стрептомицина
        5. Хранить при 4 ° C
      2. Среда для анализа (стерильная, небуферизованная, 250 мл)
        Примечание. Работайте в стерильных условиях в вытяжном шкафу с ламинарным потоком.
        1. Автоклав Ultrapure 250 мл H 2 O в стеклянной бутылке
        2. Растворите 3,34 г порошка DMEM без NaHCO 3 и без HEPES в 250 мл автоклавированной H 2 O
        3. От тепла до 37 ° C
        4. Довести pH до 7,40 с помощью NaOH (1 M)
        5. Хранить при 4 ° C
      3. NaOH (1 M)
        Растворите гранулы NaOH 4 г в автоклаве на 100 мл H 2 O
      4. Олигомицин (10 мкМ)
        1. Приготовьте свежее в день анализа морских коньков (день 2) (см. Примечание 1)
        2. Приготовьте 1 мМ раствор в 1 мл ДМСО: Dissolve 0.7911 мг олигомицина в ДМСО
        3. Разбавьте до 10 мкМ в среде для анализа (1% ДМСО): внесите пипеткой 20 мкл 1 мМ олигомицина в 1,980 мкл среды для анализа
        4. Нагрейте до 37 ° C и при необходимости доведите до pH 7,4 с помощью NaOH (1 M)
      5. FCCP (5 мкМ)
        1. Приготовьте свежее в день анализа морских коньков (день 2) (см. Примечание 1)
        2. Приготовьте 50 мМ раствор в ДМСО: растворите 2,54 мг FCCP в 200 мкл ДМСО
        3. Разбавьте до 500 мкМ: внесите пипеткой 10 мкл 50 мМ FCCP в 990 мкл ДМСО
        4. Разбавьте до 5 мкМ в среде для анализа (1% ДМСО): внесите пипеткой 20 мкл 500 мкМ FCCP в 1,980 мкл среды для анализа
        5. Нагрейте до 37 ° C и доведите до pH 7.4 с NaOH (1 M) при необходимости
      6. Ротенон (5 мкМ) / антимицин А (5 мкМ)
        1. Приготовьте свежее в день анализа морских коньков (день 2) (см. Примечание 1)
        2. Приготовьте 50 мМ раствор в ДМСО: растворите 3,94 мг ротенона и 5,49 мг антимицина А в 200 мкл ДМСО
        3. Разбавьте до 1 мМ: внесите пипеткой 10 мкл 50 мМ ротенона / антимицина А в 490 мкл ДМСО
        4. Разбавьте до 5 мкМ в аналитической среде (0,5% ДМСО): внесите пипеткой 20 мкл 1 мМ ротенона / антимицина А в 1980 мкл аналитической среды
        5. Нагрейте до 37 ° C и доведите до pH 7.4 с NaOH (1 М) при необходимости

      Благодарности

      Работа в основном поддержана стартовыми фондами ОГУ. Б.П. благодарит DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) за финансирование постдокторантуры (PL 799 / 1-1). Мы хотим поблагодарить доктора Напура Панде за предоставление клеток SK-Mel-28 и компанию Bioviotica (проф. Доктора Акселя Зика и Ханса-Петера Кролла) за предоставление менсакарцина. Мы хотели бы поблагодарить Элизабет Н. Кависа за помощь с этим протоколом, а также доктора Джеффри Д. Серрилла и проф.Джейн Э. Измаил за информацию и отзывы об экспериментах с морскими коньками. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов или конкурирующих интересов.

      Ссылки

      1. Д’Суза, Г. Г., Уэгл, М. А., Саксена, В., и Шах, А. (2011). Подходы к нацеливанию на митохондрии в терапии рака. Biochim Biophys Acta 1807 (6): 689-696.
      2. Коппенол, В. Х., Баундс, П. Л. и Данг, К. В. (2011). Вклад Отто Варбурга в современные концепции метаболизма рака. Nat Rev Cancer 11 (5): 325-337.
      3. Ли, З., Грэм, Б. Х. (2012). Измерение потребления кислорода митохондриями с помощью электрода Кларка. Методы Мол Биол 837: 63-72.
      4. Плитцко, Б., Кависа, Э. Н. и Лоесген, С. (2017). Натуральный продукт менсакарцин вызывает митохондриальную токсичность и апоптоз в клетках меланомы. J Biol Chem 292 (51): 21102-21116.
      5. Серилл, Дж. Д., Тан, М., Фоцо, С., Сикорска, Дж., Касана, Н., Хау, А. М., Макфейл, К. Л., Сантоза, Д. А., Забриски, Т. М., Махмуд, Т., Виолле, Б., Протеу, П. Дж. И Измаил, Дж. Э. (2015). Апоптолодины A и C активируют AMPK в метаболически чувствительных типах клеток и механически отличаются от олигомицина A. Biochem Pharmacol 93 (3): 251-256.
      6. Теслаа, Т., Тейтелл, М.А. (2014). Методы контроля гликолиза. Methods Enzymol 542: 91-114.
      7. Ву, М., Neilson, A., Swift, AL, Moran, R., Tamagnine, J., Parslow, D., Armistead, S., Lemire, K., Orrell, J., Teich, J., Chomicz, S. и Феррик, Д.А. (2007). Многопараметрический метаболический анализ показывает тесную связь между ослабленной биоэнергетической функцией митохондрий и повышенной зависимостью от гликолиза в опухолевых клетках человека. Am J Physiol Cell Physiol 292 (1): C125-136.
      8. Чжэн, Дж. (2012). Энергетический метаболизм рака: гликолиз против окислительного фосфорилирования (обзор). Oncol Lett 4 (6): 1151-1157.
    Пожалуйста, войдите или зарегистрируйтесь, чтобы просмотреть полный текст

    Просмотр полного текста

    Скачать PDF

    Вопросы и ответы

    Авторские права: © 2018 Авторы; эксклюзивный лицензиат ООО «Биопротокол».

    .

    2018 Бетононасос для стяжки пола 60 куб. М в час в Китае

    2018 Бетононасос для стяжки пола мощностью 60 куб. М в час в Китае

    Основные характеристики

    Усовершенствованная гидравлическая система обеспечивает стабильную работу.

    ♦ Интеллектуальная система управления мощностью автоматически регулирует частоту вращения двигателя, чтобы обеспечить плавную и эффективную работу

    .

    ♦ Плунжерный насос с постоянной мощностью для обеспечения эффективности основного двигателя.
    ♦ Компоненты из высококачественного износостойкого сплава обеспечивают долгий срок службы.
    ♦ Высокое давление подачи соответствует требованиям высотных и дальних проектов.
    ♦ Система ПЛК обеспечивает наилучшее управление.
    ♦ С функцией повторной откачки.

    Данные

    90 041
    Модель CP30D CP50D CP60D CP90D

    Теория транспортировки бетона

    Производительность

    (Низкое / Высокое давление)

    50/34 м 3 50/34 м / ч 70/50 м 3 / ч 80/47 м 3 / ч 89/45 м 3 / ч
    Теоретическое выходное давление
    (низкое / высокое давление)
    4.8 / 8,0 МПа 5,3 / 10 МПа 9/16 МПа 10/18 МПа
    Номинальная мощность дизеля 56 кВт 92 кВт 110 кВт 174 кВт
    Доставка диаметр цилиндра Φ100xφ65 Φ100xφ65 Φ140Xφ90 Φ135Xφ90
    Ход нагнетательного цилиндра 800 мм 1400 мм 1850 мм 1800 мм
    Распределительный клапан Фартук клапан S клапан S клапан
    Объем загрузочного бункера 650 л 650 л 800 л 700 л
    Высота загрузочного бункера 1200 мм 1200 мм 1400 мм 1350 мм
    Выходной диаметр Φ150 Φ150 Φ200 Φ175

    1.Типы подключения.Различные типы подключения имеют разные преимущества и недостатки. При прямом соединении сопротивление откачке невелико, но при перекачке на высокие этажи бетон может легко стекать в обратном направлении, поэтому этот тип подходит для подачи бетона горизонтально или вниз; Для U-образного соединения сопротивление перекачиванию велико, но бетон не течет обратно легко, поэтому этот тип подходит для подачи бетона на высокие этажи. Для соединения типа L сопротивление перекачиванию находится между двумя упомянутыми выше типами, но поперечное противодействие велико, поэтому коническая труба должна быть надежно закреплена.

    2. Если расстояние между смесительной станцией и рабочей площадкой находится далеко, осадку бетона необходимо измерить после того, как автобетоносмеситель прибудет на рабочую площадку, потому что осадка бетона исчезнет после длительной транспортировки. Это вызовет затруднение перекачки, даже засорение трубы. Если потеря осадки слишком велика, воду и цемент следует добавлять одновременно в том же соотношении вода / цемент.

    3. Если для перекачки бетона используется бетононасос, заливка бетона очень важна.Если заливка не будет произведена вовремя, бетон может скапливаться и накапливаться, что приведет к повышению давления насоса и блокировке трубопровода.

    Подробные изображения

    Упаковка и доставка

    О нас

    ♦ Ханчжоу Dongkun Technology Co., Ltd. решения в области технологий и вспомогательного оборудования для профессиональных поставщиков.
    ♦ DKTEC предоставит полный комплект запасных частей и принадлежностей для бетонных заводов в соответствии с вашими потребностями, предоставит вам универсальное отличное бизнес-обслуживание.

    Наша служба

    Предпродажная служба

    Послепродажная служба

    ♦ Запрос и консультационная поддержка. ♦ Обучение установке / эксплуатации машины,
    ♦ Предоставляется техническая информация. ♦ Хорошая и быстрая организация отгрузки.
    ♦ Ценовое предложение с детальной настройкой. ♦ Инженеры, обслуживающие технику за рубежом.

    Свяжитесь с нами

    Сопутствующие товары

    .

    Обзор текущих методов

    Исследовательский интерес к беспроводным сенсорным сетям (WSN) возрос в результате возможности их широкого использования во многих различных областях, таких как домашняя автоматизация, безопасность, мониторинг окружающей среды и многие другие. Несмотря на достигнутые успехи, широкому распространению WSN, особенно в удаленных и труднодоступных местах, где их использование наиболее выгодно, препятствует серьезная проблема ограниченного энергопотребления, поскольку в большинстве случаев они работают от батарей.Чтобы продлить срок службы этих энергоемких сенсорных узлов, в литературе были предложены схемы управления энергопотреблением, чтобы поддерживать сенсорные узлы в рабочем состоянии, делая сеть более работоспособной и эффективной. В настоящее время упор делается на сбор энергии, передачу энергии и методы энергосбережения в качестве основных средств поддержания срока службы сети. Эти методы управления энергопотреблением предназначены для балансировки энергии во всей сети. В настоящем обзоре представлено состояние дел в схемах управления энергопотреблением, нерешенные проблемы и открытые вопросы для будущей исследовательской работы.

    1. Введение

    Энергоэффективность стала основной темой в исследованиях беспроводных сенсорных сетей (WSN). Интерес к энергоэффективности можно объяснить ограничениями, налагаемыми батареями, используемыми для питания таких устройств. Эти батареи обычно являются основным источником питания для этих устройств и характеризуются ограниченным сроком службы, после чего они перезаряжаются или выбрасываются. WSN образуют основу повсеместных вычислительных приложений, таких как военное наблюдение, катастрофы, окружающая среда, конструкция, здоровье и безопасность, мониторинг дикой природы и среды обитания, а также точное земледелие.Развертывание сенсорных узлов обычно происходит в недоступных средах, и при ограниченной емкости батарей их срок службы обычно вызывает серьезную озабоченность. В литературе было предложено несколько методов увеличения срока службы сенсорных узлов, а также сенсорных сетей [1–6]. В последнее время были предложены долговечные сенсорные узлы, которые могут никогда не умереть [7–9].

    Было предложено несколько определений срока службы сенсорной сети; тем не менее, общепринятое определение - это когда сеть деградирует до точки, когда она больше не может выполнять предполагаемую функцию [10].Это может произойти, когда происходит любое из следующих событий: когда первый сенсорный узел умирает, или когда умирает некоторое количество или процент узлов, или когда сеть разделена таким образом, что нет связи между подсетями, или когда покрытие теряется [10– 12].

    Для увеличения срока службы сенсорных узлов и сетей обычно используются методы энергосбережения. При этом делается попытка снизить потребление энергии устройством. Авторы в [3] поделили схемы энергосбережения на три основных категории: рабочий цикл, методы, основанные на данных и методы, основанные на мобильности.Дежурный цикл направлен на сокращение простоя прослушивания, когда радиостанция узла напрасно ждет кадров и подслушивания, когда узлы остаются активными, прослушивая незаинтересованные кадры. Методы, управляемые данными, используют некоторые параметры самих данных для принятия решений по снижению потребления энергии во время связи, в то время как схемы мобильности рассматривают мобильность приемных или ретрансляционных узлов как фактор, влияющий на энергию, потребляемую в сети.

    На рисунке 1 показана архитектура типичного беспроводного сенсорного узла.Представлен каждый компонент сенсорного узла, как видно на MicaZ mote. Как можно заметить, типичный узел будет состоять из четырех основных компонентов, чувствительного блока, блока обработки, блока связи и блока питания. Из различных компонентов блок связи, который включает в себя передачу данных (включая передачу и прием), потребляет значительно большую долю доступной энергии [13]. Это показано на Рисунке 11.


    Типичные методы энергосбережения просто стремятся продлить срок службы сети за счет сокращения потребляемой энергии и обычно не требуют внедрения новых источников энергии.Для увеличения энергии, доступной для сенсорных узлов, были предложены методы сбора энергии [14, 15]. Ключевым ограничением этого метода является то, что источники энергии не всегда могут быть доступны, и, следовательно, существует необходимость хранить собранную энергию с использованием перезаряжаемых батарей или маломощных суперконденсаторов, как на рисунке 2, хотя в некоторых случаях энергия используется непосредственно узлами. как показано на рисунке 3.



    Другой недавний метод, используемый для продления срока службы узлов датчиков и сети, заключается в передаче энергии от узла, богатого энергией, к узлам с дефицитом энергии.Передача энергии может осуществляться по беспроводной сети от специализированного узла сбора энергии или узла с энергоресурсами к энергоемкому узлу в той же сети. Передача энергии может быть непрерывной или по требованию, но ограничена стоимостью связанных с ней потерь заряда и разряда. В литературе было предложено несколько подходов для обеспечения надежной передачи энергии для увеличения срока службы сети [9, 16–22].

    Метод обеспечения того, чтобы узлы имели достаточно энергии для работы в сети, путем поддержания соответствующих уровней энергии и передачи энергии от узла с энергоресурсами к энергоемкому узлу в той же сети, называется балансировкой энергии.Использование подхода балансировки энергии для продления срока службы сетей может включать использование любой из следующих схем или их комбинации: энергосбережение, сбор энергии или беспроводная передача энергии. Энергосбережение - это экономное использование энергии в сенсорных узлах, чтобы сенсорные сети могли функционировать в соответствии с требованиями [3]. Обычно это включает в себя минимизацию затрат на связь в узлах [3, 15], поскольку известно, что радио является самым большим потребителем доступной энергии [12, 23, 24].Этого также можно достичь за счет разработки энергоэффективных протоколов маршрутизации, подходов к кластеризации, оптимизации сна / пробуждения (рабочий цикл) и в некоторых случаях мобильности [15, 25, 26].

    Схемы управления энергией - это методы, разработанные для эффективного использования энергии в сети [23] и, в некоторых случаях, для эффективного использования собранной энергии [15]. Хотя некоторые из предложенных методов управления энергией предполагают, что сбор данных посредством зондирования потребляет меньше энергии, чем передача данных [3, 23], это может быть не так для всех приложений [27, 28], особенно в случае энергоемких датчиков, например.г., датчики газа. Большинство из этих методов используются для продления срока службы узлов датчиков за счет снижения потребления энергии или восполнения потребляемой энергии в узлах с батарейным питанием или маломощных конденсаторах. В этой статье мы пытаемся разделить предлагаемые методы управления энергией на механизмы энергосбережения, сбор энергии и механизмы передачи энергии / беспроводной зарядки. В некоторых приложениях [29, 30] зондирование может потреблять значительный процент доступной энергии.Широкие категории управления энергопотреблением, используемые в этой статье, включают механизмы энергосбережения, сбор энергии и механизмы передачи энергии / беспроводной зарядки, как показано на рисунке 4. Целостный подход к достижению баланса энергии в сети не должен ограничиваться только сбором энергии и передача, но также должна включать энергосбережение.


    В этой статье мы представляем состояние дел в схемах управления энергопотреблением (т. Е. Сбор энергии, энергосбережение и передача энергии) и представляем методы, используемые для сбора, передачи и сохранения энергии в WSN.Мы обсуждаем схемы управления, связанные с оптимизацией радиосвязи, сокращением данных, агрегированием, сжатием и прогнозированием, а также технологиями и методами беспроводной передачи. Мы представляем концепцию балансировки энергии в беспроводной сенсорной сети, когда сбор, передача и сохранение энергии используются эффективно. Мы обсуждаем ограничения в существующих симуляторах и эмуляторах, которые предназначены для моделирования приложений WSN. Наконец, мы обсуждаем проблемы и направления будущих исследований для схем управления энергией.

    Остальная часть статьи организована следующим образом. В Разделе 2 мы описываем различные доступные источники сбора энергии и подходы. В разделе 3 мы описываем различные методы и технологии беспроводной передачи энергии и представляем различные инструменты моделирования и эмуляции для моделирования недавних приложений WSN. В разделе 4 представлены современные методы энергосбережения. В разделе 5 представлены текущие схемы энергобаланса. В разделе 6 мы представляем проблемы, связанные со схемами управления энергопотреблением, и представляем направления будущих исследований по разработке беспроводных сенсорных сетей, которые рассматривают трио (т.е., сбор, передача и сохранение) схемы управления энергией. Наконец, раздел 7 завершает статью.

    2. Сбор энергии

    Подходы к сбору энергии собирают энергию из внешней среды, такой как ветер, вибрации, солнечные, акустические и тепловые. Методы, используемые при сборе энергии, преобразуют энергию окружающей среды в электрическую, которую можно использовать в узлах / устройствах беспроводного зондирования. В беспроводных сенсорных сетях сбор энергии может использоваться для решения проблемы истощения энергии, которая приводит к сокращению срока службы узлов в сети, а также в других случаях проблемы черной дыры [31].Чтобы реализовать обещанные преимущества сбора энергии, со стороны исследователей требуются согласованные усилия для решения некоторых нерешенных проблем. Сбор энергии не гарантирует бессмертных узлов и непрерывной работы из-за неконтролируемых источников энергии, что делает их непредсказуемыми и трудными для моделирования. Постоянная недоступность источников сбора энергии обсуждается в [15, 32, 33]; поэтому предлагается буфер для хранения энергии для последующего использования с использованием безбатарейного сенсорного узла и маломощных конденсаторов в качестве буферов [5, 34], как показано на рисунках 2 и 3.Примером является солнечная энергия, которую нельзя собирать ночью из-за отсутствия солнца [35]. В таблице 1 приведены характеристики некоторых имеющихся в продаже блоков сбора солнечной энергии для использования в сенсорных узлах. При сборе энергии к узлам в сети могут быть подключены специальные устройства для сбора энергии из окружающей среды для преобразования в электрическую энергию. В случае солнечной энергии размер панели прямо пропорционален количеству энергии, преобразованной с помощью фотоэлектрической техники [34].Это создает проблему, когда устройство сбора энергии становится больше, чем узел датчика. Поэтому в сети могут быть предусмотрены специальные устройства для сбора энергии для сбора энергии и последующей беспроводной передачи ее узлам. Технология Powercast [36] собирает энергию из преднамеренных, ожидаемых и известных источников с помощью приемников Powerharvester. Приемники Powerharvester рассчитаны на 50 стандартных антенн в диапазоне частот 902 928 МГц.


    Узел Мощность солнечной панели (мВт) Размер солнечной панели (inxin) Доступность энергии (мВтч / день) Тип хранилища Тип аккумулятора Емкость аккумулятора (мАч) Используемый узел датчика Использование MPPT

    Heliomote 190 1140 Аккумулятор Ni-MH 1800 Mica2 Нет
    HydroWatch 276 139 Батарея Ni-MH 2500 TelosB Да
    Fleck1 -
    .

    Смотрите также